隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步和國際貿(mào)易的發(fā)展，國內(nèi)外對實(shí)驗(yàn)室化學(xué)分析方法和檢測數(shù)據(jù)的質(zhì)量提出了更高要求。目前，國外已經(jīng)發(fā)布了一些關(guān)于化學(xué)分析方法的確認(rèn)規(guī)范，但我國尚未發(fā)布關(guān)于化學(xué)分析實(shí)驗(yàn)室方法確認(rèn)和驗(yàn)證的標(biāo)準(zhǔn)和指南性文件，在實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際檢測工作中，經(jīng)常遇到現(xiàn)行的檢測標(biāo)準(zhǔn)無法與快速發(fā)展的檢測手段相適應(yīng)的情況。為了提供更準(zhǔn)確、高效率的檢測服務(wù)，實(shí)驗(yàn)室往往需要采用自己制定或改進(jìn)的檢測方法，特別在化學(xué)分析領(lǐng)域，越來越多的實(shí)驗(yàn)室使用標(biāo)準(zhǔn)以外的檢測方法，但如何確保這些檢測方法的適宜性和可靠性，一直存在爭議。為此，我國出臺了該標(biāo)準(zhǔn)，是實(shí)驗(yàn)室對化學(xué)分析方法進(jìn)行確認(rèn)和方法驗(yàn)證的指南性文件，旨在提高實(shí)驗(yàn)室化學(xué)分析方法和檢測數(shù)據(jù)的質(zhì)量，確?；瘜W(xué)分析實(shí)驗(yàn)室所提供數(shù)據(jù)的有效性、公正性和可靠性。

 

　　該國標(biāo)共有6個(gè)章節(jié)，分別是范圍、引用文件、定義、方法確認(rèn)要求、方法特性參數(shù)的確認(rèn)、方法驗(yàn)證要求。另外，該國標(biāo)還有3個(gè)附錄，分別是方法回收率偏差范圍、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)變異系數(shù)、重復(fù)性和再現(xiàn)性自由度對照表。

 

　　1 范圍

 

　　本標(biāo)準(zhǔn)給出了實(shí)驗(yàn)室對化學(xué)分析方法確認(rèn)和方法驗(yàn)證的一般性原則，并指出適用于實(shí)驗(yàn)室對非標(biāo)準(zhǔn)方法、實(shí)驗(yàn)室制定的方法、超出預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法以及實(shí)驗(yàn)室對新引入的分析方法在正式使用前的方法驗(yàn)證。

 

　　2 規(guī)范性引用文件

 

　　參考了ISO/IEC 指南99:2007國際計(jì)量學(xué)詞匯-基本和通用概念及相關(guān)術(shù)語等文件。

 

　　3 術(shù)語和定義

 

　　本部分對常見的術(shù)語進(jìn)行了定義，包括：方法確認(rèn)、方法驗(yàn)證、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)方法確認(rèn)、實(shí)驗(yàn)室間方法確認(rèn)、定性方法、定量方法、確證方法、篩選方法、容許限、檢出限、定量限、精密度、靈敏度、測量區(qū)間、自由度、準(zhǔn)確度等。

 

　　需要注意的是，該部分中“方法確認(rèn)”對應(yīng)的英文是“method validation”，而“方法驗(yàn)證”對應(yīng)的英文是“method verification”，大家在閱讀時(shí)還應(yīng)注意這些和行業(yè)內(nèi)的常見定義是否有區(qū)別。

 

　　4 方法確認(rèn)要求

 

　　4.1 總則

 

　　實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對非標(biāo)準(zhǔn)方法、實(shí)驗(yàn)室制定方法、超出其預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法、擴(kuò)充和修改過的標(biāo)準(zhǔn)方法的確認(rèn)制定程序。對于確認(rèn)過的方法，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定作業(yè)指導(dǎo)書。

 

　　4.2 確認(rèn)方法的特定參數(shù)

 

　　實(shí)驗(yàn)室可在綜合考慮成本、風(fēng)險(xiǎn)和技術(shù)可行性基礎(chǔ)上，并根據(jù)預(yù)期的用途來進(jìn)行方法確認(rèn)。實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行方法確認(rèn)的內(nèi)容應(yīng)完整，包括但不限于以下方法特性：

 

　　a)方法的選擇性;

 

　　b)方法適用范圍;

 

　　c)檢出限和/或定量限;

 

　　d)測量范圍和/或線性范圍;

 

　　e)精密度(重復(fù)性和/或再現(xiàn)性);

 

　　f)穩(wěn)健度;

 

　　g)正確度;

 

　　h)準(zhǔn)確度;(注：測量結(jié)果的準(zhǔn)確度由正確度和精密度兩個(gè)指標(biāo)進(jìn)行表征。)

 

　　i)靈敏度;

 

　　j)結(jié)果的測量不確定度。

 

　　4.3 確認(rèn)方法特性參數(shù)的選擇

 

　　4.3.1 方法確認(rèn)的典型特性參數(shù)

 

　　方法確認(rèn)首先應(yīng)明確檢測對象特定的需求，包括樣品的特性、數(shù)量等，并應(yīng)滿足客戶的特殊需要，同時(shí)應(yīng)根據(jù)方法的預(yù)定用途，選擇需要確認(rèn)的方法特征參數(shù)。

 

　　典型方法確認(rèn)參數(shù)的選擇，參見表1：

 

 

　　4.3.2 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)方法確認(rèn)

 

　　通常情況下，需要確認(rèn)的技術(shù)參數(shù)包括方法的選擇性、檢出限、定量限、線性范圍、正確度、精密度和穩(wěn)健度等。

 

　　4.3.3 實(shí)驗(yàn)室間方法確認(rèn)

 

　　通常情況下，對于定性方法，至少應(yīng)確認(rèn)方法的檢出限和選擇性;對于定量方法，至少應(yīng)確認(rèn)方法的適用對象、線性范圍、定量限和精密度。

 

　　5 方法特性參數(shù)的確認(rèn)

 

　　5.1 選擇性

 

　　分析方法應(yīng)具有一定的選擇性。

 

　　5.2 測量范圍

 

　　方法的測量范圍通常應(yīng)滿足以下條件：

 

　　a)方法的測量范圍應(yīng)覆蓋方法的最低濃度水平(定量限)和關(guān)注濃度水平。

 

　　b)至少需要確認(rèn)方法測量范圍的最低濃度水平(定量限)、關(guān)注濃度水平和最高濃度水平的正確度和精密度，必要時(shí)可增加確認(rèn)濃度水平。

 

　　c)若方法的測量范圍呈線性，還應(yīng)滿足5.3條款的要求。

 

　　5.3 線性范圍

 

　　線性范圍應(yīng)盡量滿足如下標(biāo)準(zhǔn)：

 

　　a)采用校準(zhǔn)曲線法定量，并至少具有6個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)(包括空白)，濃度范圍盡可能覆蓋一個(gè)或多個(gè)數(shù)量級，每個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)至少隨機(jī)順序重復(fù)測量2次，最好是3次或更多;對于篩選方法，線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)不低于0.98;對于準(zhǔn)確定量的方法，線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)不低于0.99。

 

　　b)校準(zhǔn)用的標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)應(yīng)盡可能均勻地分布在關(guān)注的濃度范圍并能覆蓋該范圍......

 

　　c)濃度范圍一般應(yīng)覆蓋關(guān)注濃度的50%~150%，如需做空白時(shí)，則應(yīng)覆蓋關(guān)注濃度的0%~150%。

 

　　d)應(yīng)充分考慮可能的基質(zhì)效應(yīng)影響，排除其對校準(zhǔn)曲線的干擾。

 

　　5.4 檢出限和定量限

 

　　5.4.1 需要評估檢出限(LOD)和定量限(LOQ)的情況

 

　　通常情況下，只有當(dāng)目標(biāo)分析物的含量接近于“零”的情況下或者檢測濃度接近檢出限和定量限時(shí)，才需要確定方法的LOD或LOQ。

 

　　5.4.2 檢出限(LOD)

 

　　對于多數(shù)現(xiàn)代分析方法來說，LOD可分為兩個(gè)部分，即儀器檢出限(IDL)和分析方法檢出限(MDL)。應(yīng)注意兩者的區(qū)別，在該國標(biāo)中指出：使用信噪比可用來考察儀器性能，但不適用于評估方法的檢出限。

 

　　確定檢出限的方法：

 

　　在該國標(biāo)中提到了多種確定檢出限的方法，包括：

 

　　a)目視評價(jià)法評估LOD

 

　　目視評價(jià)法是通過在樣品空白中添加已知濃度的分析物，然后確定能夠可靠檢測出分析物最低濃度值的方法。即在樣品空白中加入一系列不同濃度的分析物，隨機(jī)對每一個(gè)濃度點(diǎn)進(jìn)行約7次獨(dú)立測試，通過繪制陽性(或陰性)結(jié)果百分比與濃度相對應(yīng)的反應(yīng)曲線確定閾值濃度。該方法也可用于定性方法中檢出限的確定。

 

　　b)空白標(biāo)準(zhǔn)偏差法評估LOD

 

　　即通過分析大量的樣品空白或加入最低可接受濃度的樣品空白來確定LOD。獨(dú)立測試的次數(shù)應(yīng)不少于10次(n≥10)，計(jì)算出檢測結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差，具體的計(jì)算方法可參考該國標(biāo)。

 

　　5.4.3 定量限(LOQ)

 

　　與檢出限相類似，定量限也分為儀器定量限和分析方法定量限。

 

　　5.5 正確度

 

　　測量結(jié)果的正確度用于表述無窮多次重復(fù)性測定結(jié)果的平均值與參考值之間的接近程度，測量結(jié)果的偏倚則通過回收率實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評估。

 

　　5.6 精密度

 

　　該國標(biāo)中對精密度的描述分別從重復(fù)性、再現(xiàn)性兩個(gè)維度進(jìn)行描述。

 

　　5.7 穩(wěn)健度

 

　　穩(wěn)健度可通過由實(shí)驗(yàn)室引入預(yù)先設(shè)計(jì)好的微小的合理變化因素，并分析其影響而得出?？蓪悠愤M(jìn)行預(yù)處理、凈化、分析等可能影響檢測結(jié)果的方面進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，并分析可能影響結(jié)果的因素，必要時(shí)進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行穩(wěn)健度試驗(yàn)。

 

　　5.8 測量不確定度

 

　　該國標(biāo)中列舉了可能影響不確定度的多方面因素，并對測量不確定度評估時(shí)的考慮要點(diǎn)進(jìn)行了介紹。

 

　　6 方法驗(yàn)證要求

 

　　對分析方法的驗(yàn)證提出總體要求，包括定量分析和定性分析。在驗(yàn)證總則中提到，當(dāng)化學(xué)分析實(shí)驗(yàn)室引入標(biāo)準(zhǔn)方法時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)該國標(biāo)的相應(yīng)要求進(jìn)行驗(yàn)證，即證實(shí)該方法能在該實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的設(shè)施設(shè)備、人員、環(huán)境等條件下獲得令人滿意的結(jié)果。