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    簡單介紹在液相色譜儀檢測分析樣品的幾個要點

    作者:達(dá)宏美拓更新時間:2015-12-04 15:03:28來源:http://www.k8cly6.com瀏覽:
    流動相比例調(diào)整:我國藥品標(biāo)準(zhǔn)中沒有規(guī)定色譜柱的長度及填料的粒度,因此每次檢測一個新樣品時都須重新調(diào)整流動相,所以建議第一次檢驗樣品時配備適量的流動相即可,以免浪費。制備流動相的標(biāo)準(zhǔn),主峰一般應(yīng)調(diào)至保留時間為6~15分鐘為宜。弱電解質(zhì)的流動相其重現(xiàn)性更不容易達(dá)到,應(yīng)當(dāng)注意充分平衡色譜柱。
    樣品配制:樣品溶液從待檢測樣品原料中提取出來之后,須經(jīng)氮吹儀提純結(jié)晶之后配置成一定濃度的溶液,再使 用溶劑過濾器進(jìn)行過濾處理,方可進(jìn)入儀器。除此之外,盛放溶液的溶劑避免使用塑料材質(zhì),塑料容器常含有高沸點的增塑劑,可能釋放到樣品液中造成污染,而且還會吸留某些藥物,引起分析誤差。某些堿性藥物會被玻璃容器表面吸附,影響樣品中藥物的定量回收,因此必要時應(yīng)將玻璃容器進(jìn)行硅烷化處理。
    進(jìn)樣量:檢測樣品的進(jìn)樣量一般為10L,主要根據(jù)定量環(huán)的規(guī)格而定,目前多數(shù)HPLC系統(tǒng)采用定量環(huán)規(guī)格有10L、20L和50L,因此應(yīng)注意進(jìn)樣量是否一致。
    記錄時間:樣品進(jìn)入色譜柱后,第一次測定時,應(yīng)先將空白溶劑、對照品溶液及供試品溶液各進(jìn)一針,并盡量收集較長時間的圖譜(30分鐘以上),以便確定樣品中被分析組分峰的位置、分離度、理論板數(shù)及是否還有雜質(zhì)峰在較長時間內(nèi)才洗脫出來,確定是否會影響主峰的測定。
    計算:檢測結(jié)果的計算主要根據(jù)色譜圖,色譜圖是色譜儀定性定量分析的依據(jù)。色譜圖的橫軸表示保留時間,可以作為色譜儀器實現(xiàn)定性分析的依據(jù);色譜峰上的極大值是定性分析的依據(jù),而色譜峰所包羅的面積則取決于對應(yīng)組分的含量,定量分析的依據(jù)。需要注意的是,由于有些對照品標(biāo)示含量的方式與樣品標(biāo)示量不同,有些是復(fù)合鹽、有些含水量不同、有些是鹽基不同或有些是采用有效部位標(biāo)示,檢驗時須注意。
    液相色譜儀檢測樣品注意事項如下:①流動相濾過后,注意觀察有無肉眼能看到的微粒、纖維,至少過濾三次;②柱在線時,增加流速應(yīng)以0.1ml/min的增量逐步進(jìn)行,一般不超過1ml/min,反之亦然。否則會使柱床下塌,叉峰。柱不線時,要加快流速也需以每次0.5ml/min的速率遞增上去(或下來),勿急升(降),以免泵損壞。③安裝柱時,請注意流向,接口處不要留有空隙。④樣品液請注意濾過(注射液可不需濾過)后進(jìn)樣,注意樣品溶劑的揮發(fā)性。⑤測定完畢請用水沖柱1小時,甲醇30分鐘。如果第二天仍使用,可用水以低流速(0.1~0.3ml/min)沖洗過夜(注意水要夠量),不須沖洗甲醇。另外需要特別注意的是:對于含碳量高、封尾充分的柱,應(yīng)先用含5~10%甲醇的水沖洗,再用甲醇沖洗。⑥沖水的同時請用水充分沖洗柱頭(如有自動清洗裝置系統(tǒng),則應(yīng)更換水)。
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