簡單介紹在液相色譜儀檢測分析樣品的幾個要點

流動相比例調(diào)整：我國藥品標(biāo)準(zhǔn)中沒有規(guī)定色譜柱的長度及填料的粒度，因此每次檢測一個新樣品時都須重新調(diào)整流動相，所以建議第一次檢驗樣品時配備適量的流動相即可，以免浪費。制備流動相的標(biāo)準(zhǔn)，主峰一般應(yīng)調(diào)至保留時間為6~15分鐘為宜。弱電解質(zhì)的流動相其重現(xiàn)性更不容易達(dá)到，應(yīng)當(dāng)注意充分平衡色譜柱。
樣品配制：樣品溶液從待檢測樣品原料中提取出來之后，須經(jīng)氮吹儀提純結(jié)晶之后配置成一定濃度的溶液，再使 用溶劑過濾器進(jìn)行過濾處理，方可進(jìn)入儀器。除此之外，盛放溶液的溶劑避免使用塑料材質(zhì)，塑料容器常含有高沸點的增塑劑，可能釋放到樣品液中造成污染，而且還會吸留某些藥物，引起分析誤差。某些堿性藥物會被玻璃容器表面吸附，影響樣品中藥物的定量回收，因此必要時應(yīng)將玻璃容器進(jìn)行硅烷化處理。
進(jìn)樣量：檢測樣品的進(jìn)樣量一般為10L，主要根據(jù)定量環(huán)的規(guī)格而定，目前多數(shù)HPLC系統(tǒng)采用定量環(huán)規(guī)格有10L、20L和50L，因此應(yīng)注意進(jìn)樣量是否一致。
記錄時間：樣品進(jìn)入色譜柱后，第一次測定時，應(yīng)先將空白溶劑、對照品溶液及供試品溶液各進(jìn)一針，并盡量收集較長時間的圖譜（30分鐘以上），以便確定樣品中被分析組分峰的位置、分離度、理論板數(shù)及是否還有雜質(zhì)峰在較長時間內(nèi)才洗脫出來，確定是否會影響主峰的測定。
計算：檢測結(jié)果的計算主要根據(jù)色譜圖，色譜圖是色譜儀定性定量分析的依據(jù)。色譜圖的橫軸表示保留時間，可以作為色譜儀器實現(xiàn)定性分析的依據(jù)；色譜峰上的極大值是定性分析的依據(jù)，而色譜峰所包羅的面積則取決于對應(yīng)組分的含量，定量分析的依據(jù)。需要注意的是，由于有些對照品標(biāo)示含量的方式與樣品標(biāo)示量不同，有些是復(fù)合鹽、有些含水量不同、有些是鹽基不同或有些是采用有效部位標(biāo)示，檢驗時須注意。
液相色譜儀檢測樣品注意事項如下：①流動相濾過后，注意觀察有無肉眼能看到的微粒、纖維，至少過濾三次；②柱在線時，增加流速應(yīng)以0.1ml/min的增量逐步進(jìn)行，一般不超過1ml/min，反之亦然。否則會使柱床下塌，叉峰。柱不線時，要加快流速也需以每次0.5ml/min的速率遞增上去（或下來），勿急升（降），以免泵損壞。③安裝柱時，請注意流向，接口處不要留有空隙。④樣品液請注意濾過（注射液可不需濾過）后進(jìn)樣，注意樣品溶劑的揮發(fā)性。⑤測定完畢請用水沖柱1小時，甲醇30分鐘。如果第二天仍使用，可用水以低流速（0.1~0.3ml/min）沖洗過夜（注意水要夠量），不須沖洗甲醇。另外需要特別注意的是：對于含碳量高、封尾充分的柱，應(yīng)先用含5~10%甲醇的水沖洗，再用甲醇沖洗。⑥沖水的同時請用水充分沖洗柱頭（如有自動清洗裝置系統(tǒng)，則應(yīng)更換水）。